ترجمه مقاله نقش ضروری ارتباطات 6G با چشم انداز صنعت 4.0
- مبلغ: ۸۶,۰۰۰ تومان
ترجمه مقاله پایداری توسعه شهری، تعدیل ساختار صنعتی و کارایی کاربری زمین
- مبلغ: ۹۱,۰۰۰ تومان
تحلیل غنی سازی مسیر KEGG
بحث
نتیجه گیری
Western blot analysis
Equal amount of proteins (50μg) from three biological replicates were separated on a 12% SDS-PAGE gel and. The uniformity of the protein amount loaded on the gels was also visulized by staining SDS-PAGE gels using Coomassie Brilliant Blue (Fig. S3). For Western blot analysis, proteins were electrophoretically transferred onto polyvinylidine difluoride membranes (Bio-Rad). The blots were blocked with TBST (20mM tris-HCl, pH 7.6, 150mM NaCl, and 0.1%ween-20), containing 5% BSA, followed by incubation with primary antibody solution overnight at 4 °C. After washing with TBST, the membranes were incubated with horseradish peroxidase (HRP)-conjugated secondary antibody at room temperature for 1h. Signals were detected with ECL substrate (GE) using Hyperfilm (GE). Supplemental Table S3 represents the primary and secondary antibodies used. Gapdh was used as the loading control. Protein bands were quantified by using ImageJ software. The volume of each band was analyzed using student’s t-test.
تحلیل وسترن بلات
مقدار مساوی از پروتئین ها (50 μ g) از تکرارهای بیولوژیکی برروی 12 درصد ژل SDS-PAGE جدا شدند. با رنگ آمیزی ژلهای SDS-PAGE با استفاده از Coomassie Brilliant Blue، یکنواختی مقدار پروتئین بارگذاری شده برروی ژلها نیزمشاهده گردید (شکل S3). برای تحلیل وسترن بلات، پروتئین ها به روش الکتروفورتیک به غشاهای پلی وینیلیدین دی فلوئورید منتقل شدند (Bio-Rad). بلات ها با (tris-HCl, pH 7.6, 150 mM NaCl, and 0.1%ween-20), 20 mM)، محتوی 5 درصد BSA بلاکه شده، سپس عملیات انکوباسیون با محلول آنتی بادی اولیه به صورت شبانه در دمای 4 درجه سانتی گراد انجام شد. پس از شستشو با TBST، غشاها با آنتی بادی ثانویه مزدوج شده با هورس رادیش پروکسیداز (HRP) در دمای اتاق به مدت 1 ساعت انکوبه شدند. با استفاده از Hyperfilm (GE) سیگنالها با سوبسترای ECL (GE) تشخیص داده شدند. جدول تکمیلی S3 آنتی بادیهای اولیه و ثانویه استفاده شده را نشان می دهد. از Gapdh به عنوان کنترل بارگذاری استفااده گردید. باندها یا نوارهای پروتئین بااستفاده از نرم افزار ImageJ تعیین شدند. حجم هر باند با استفاده از آزمون تی استودنت مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.