آزمایشگاه بیان ژن، موسسه مطالعات زیست شناسی سل، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا
doi یا شناسه دیجیتال
https://doi.org/10.1038/nprot.2012.154
۰.۰(بدون امتیاز)
امتیاز دهید
فهرست مطالب
مقدمه
آزمایشاتی برای تشخیص لاین ESC و iPSC
آنالیز DNA fingerprinting و HLA
مقایسه با سایر روش ها
طراحی آزمایش
مواد و روش ها
مواد
روش
رنگ آمیزی AP . زمان رنگ آمیزی 30 دقیقه
تشخیص پرتوانی . زمان بندی : 2 روز
عیب یابی
تشخیص تمایز در Ebs
عیب یابی
تشخیص افتراقی با EBs در یک slideFlask . زمان بندی: 3 روز
تشخیص تمایزی در تراتوما . زمان بندی : 4 روز
a)غوطه ور سازی در پارافین . زمان بندی 6 تا 8 روز
(B) تکثیر سلولی در تراتوما . زمان بندی: 6 تا 8 روز
(c) تشخیص مرگ سلول در برابر تکثیر در تراتوما . زمان بندی: 7 روز
عیب یابی
نتایج پیش بینی شده
نمونه چکیده متن اصلی انگلیسی
Characterization of pluripotent stem cells is required for the registration of stem cell lines and allows for an impartial and objective comparison of the results obtained when generating multiple lines. It is therefore crucial to establish specific, fast and reliable protocols to detect the hallmarks of pluripotency. Such protocols should include immunocytochemistry (takes 2 d), identification of the three germ layers in in vitro–derived embryoid bodies by immunocytochemistry (immunodetection takes 3 d) and detection of differentiation markers in in vivo–generated teratomas by immunohistochemistry (differentiation marker detection takes 4 d). Standardization of the immunodetection protocols used ensures minimum variations owing to the source, the animal species, the endogenous fluorescence or the inability to collect large amounts of cells, thereby yielding results as fast as possible without loss of quality. This protocol provides a description of all the immunodetection procedures necessary to characterize mouse and human stem cell lines in different circumstances.
نمونه چکیده ترجمه متن فارسی
توصیف سلول های بنیادی پرتوان برای ثبت سلول های بنیادی ضروری است و امکان مقایسه ی بی طرف و عینی نتایج حاصل از تولید لاین های چندگانه را فراهم می آورد. بنابراین بسیار مهم است که پرتکل های خاص ، سریع و قابل اعتماد برای تشخیص نشانه های پرتوانی فراهم کنیم. چنین پروتکل هایی باید شامل ایمونوسیتوشیمی (2 روز طول می کشد)، شناسایی سه لایه زایا در بدن جنین های حاصل از in vitro توسط ایمونوسیتوشیمی (تشخیص ایمنی 3 روز طول می کشد) و تشخیص مارکرهای تمایز در تراتومهای تولید شده در in vivo توسط ایمونوهیستوشیمی (تشخیص مارکر تمایزی 4 روز طول می کشد) باشد. استاندارد سازی پروتکل های تشخیص ایمنی حداقل تغییرات به دلیل منبع، گونه های حیوانی، فلوروسنس درون زا و یا عدم توانایی جمع آوری مقادیر زیادی از سلول ها را تضمین می کند، در نتيجه نتایج هرچه سریعتر بدون کاهش کيفيت حاصل می شوند. این پروتکل شرحی از تمام روشهای تشخیص ایمنی لازم برای مشخص کردن رده های سلول بنیادی موش و انسان در شرایط مختلف را ارائه می دهد.