تلفن: ۰۴۱۴۲۲۷۳۷۸۱
تلفن: ۰۹۲۱۶۴۲۶۳۸۴

ترجمه مقاله توقف مسیر اتصال پایانی غیر همولوگی (NHEJ)، توسط مهار کننده زیرواحد کاتالیزوری کیناز پروتئین وابسته به DNA – نشریه NATURE

عنوان فارسی: توقف مسیر اتصال پایانی غیر همولوگی (NHEJ)، توسط مهارکننده زیرواحد کاتالیزوری کیناز پروتئین وابسته به DNA (DNA-PKcs)، با نام NU7026 مانع از تخریب HBV cccDNA توسط کریسپر/کَس 9 (CRISPR/Cas9) می شود
عنوان انگلیسی: Suppressing the NHEJ pathway by DNA-PKcs inhibitor NU7026 prevents degradation of HBV cccDNA cleaved by CRISPR/Cas9
تعداد صفحات مقاله انگلیسی : 11 تعداد صفحات ترجمه فارسی : 26 (3 صفحه رفرنس انگلیسی)
سال انتشار : 2019 نشریه : NATURE
فرمت مقاله انگلیسی : pdf و ورد تایپ شده با قابلیت ویرایش فرمت ترجمه مقاله : pdf و ورد تایپ شده با قابلیت ویرایش
فونت ترجمه مقاله : بی نازنین سایز ترجمه مقاله : 14
نوع مقاله : ISI پایگاه : اسکوپوس
نوع ارائه مقاله : ژورنال ایمپکت فاکتور(IF) مجله : 4.130 در سال 2020
شاخص H_index مجله : 213 در سال 2021 شاخص SJR مجله : 1.240 در سال 2020
شناسه ISSN مجله : 2045-2322 شاخص Q یا Quartile (چارک) : Q1 در سال 2020
کد محصول : 11769 وضعیت ترجمه : انجام شده و آماده دانلود در فایل ورد و pdf
محتوای فایل : zip حجم فایل : 4.36Mb
رشته و گرایشهای مرتبط با این مقاله: پزشکی و غدد و متابولیسم، ویروس شناسی پزشکی
مجله: گزارش های علمی - Scientific Reports
دانشگاه: موسسه تحقیقات مرکزی اپیدمیولوژی، هپاتیت ویروسی، فدراسیون روسیه
وضعیت ترجمه عناوین تصاویر: ترجمه شده است ✓
وضعیت ترجمه متون داخل تصاویر: ترجمه شده است ✓
وضعیت ترجمه منابع داخل متن: به صورت عدد درج شده است ✓
وضعیت فرمولها و محاسبات در فایل ترجمه: ندارد☓
ضمیمه: ندارد☓
بیس: است✓
مدل مفهومی: ندارد☓
پرسشنامه: ندارد☓
متغیر: ندارد☓
فرضیه: ندارد☓
رفرنس : دارای رفرنس در داخل متن و انتهای مقاله
رفرنس در ترجمه: در داخل متن و انتهای مقاله درج شده است
doi یا شناسه دیجیتال: https://doi.org/10.1038/s41598-019-38526-6
ترجمه این مقاله با کیفیت عالی آماده خرید اینترنتی میباشد. بلافاصله پس از خرید، دکمه دانلود ظاهر خواهد شد. ترجمه به ایمیل شما نیز ارسال خواهد گردید.
فهرست مطالب

نتایج

سمی بودن مولکول های کوچک و تاثیرات بر پایداری و چرخه سلولی

طراحی کریسپر/کَس 9 (CRISPR/Cas9).

فعالیت ضد HBV، کریسپر/کَس 9 (CRISPR/Cas9) در یک محیط NHEJ/HR.

مهار NHEJ توسط NU7026 منجر به ویرایش بیش از حد میانی-کریسپر/کَس 9 (CRISPR/Cas9) از HBV ccDNA می شود.

بحث

مواد و روش ها

کشت سلولی و ترانسفکشن

مولکول های کوچک

تحلیل قابلیت زیستی سلول

ساختارهای CRISPR/Cas9.

جداسازی اسیدهای نوکلئیک

تحلیل PCR.

ایمونوفلورسانس (پرتوافشانی ایمن).

تشخیص آپوپتوسیس

توالی نسل-بعدی

تحلیل آماری

منابع

نمونه متن انگلیسی

Chronic hepatitis B is a severe liver disease caused by hepatitis B virus (HBV) infection. Covalently closed circular DNA (cccDNA), a super-spiralized, double-stranded form of the HBV genome, is the major determinant of viral persistence. CRISPR/Cas9 nucleases have been recently shown to introduce doublestranded DNA breaks into HBV cccDNA. The inficted damage results predominantly in erroneous repair of cccDNA by non-homologous end-joining (NHEJ). NHEJ has been suggested to enhance anti-HBV activity of CRISPR/Cas9 and increase cccDNA mutation. In this study, we assessed anti-HBV activity of CRISPR/Cas9 and cccDNA repair outcomes in an altered NHEJ/HR environment. NU7026, a strong inhibitor of NHEJ, prevented CRISPR/Cas9-mediated degradation of cccDNA and resulted in frequent on-target deletions. We conclude that CRISPR/Cas9 is a highly efective tool to degrade cccDNA and frst demonstrate that inhibiting NHEJ impairs cccDNA degradation.

Hepatitis B virus (HBV) chronically infects 250 million people worldwide, and more than a million people die from consequences of chronic hepatitis B (CHB), mainly cirrhosis and hepatocellular carcinoma (HCC)1–3 . HBV belongs to the family Hepadnaviridae. Te viral genome of the enveloped HBV particle comprises a circular, partially double-stranded DNA that is synthesized from an RNA intermediate using a reverse transcriptase. Upon entry, HBV virions are uncoated, and relaxed circular DNA is transported into the nucleus where it is repaired to form covalently closed circular DNA (cccDNA). cccDNA is the key component of that HBV life cycle that serves as a template for transcription of all viral mRNAs including pre-genomic RNA (pgRNA)4–6

 

Next-generation sequencing. Regions targeted by CRISPR/Cas9 and potential off- arget regions were amplifi d using pairs of specific primers and Q5 polymerase. Amplicons were gel-purifi d and extracted using Qiagen gel extraction kit, quantifi d with a Qubit 2.0 Fluorometer (Life Technologies), and pooled in equimolar ratios. Adapters for Illumina sequencing were then attached. Libraries were sequenced with 250 paired-end reads using the MiSeq instrument (Illumina). FASTQC sofware and Geneious sofware were used for quality assessment, reference alignment, discarding low-quality reads/nucleotides, and calculating substitutions and indels. Per-base sequence quality and per-sequence quality scores in all groups were >30.

نمونه متن ترجمه

هپاتیت مزمن B، یک بیماری شدید کبدی است که توسط انتقال ویروس هپاتیت B (HBV) ایجاد می شود. DNA حلقوی بسته کووالانسی (cccDNA)، یک شکل استاندارد دوگانه فوق مارپیچ از ژنوم HBV، تعیین کننده اصلی پایداری ویروسی است. در حال حاضر، نوکلئاز های کریسپر/کَس 9 (CRISPR/Cas9) نشان داده شده اند تا DNA دو رشته ای را معرفی کنند که به HBV cccDNA شکسته می شود. آسیب تحمیلی، عمدتا در ترمیم نادرست cccDNA ، از  اتصال پایانی غیرهمولوگی (NHEJ)  ناشی می شود. NHEJ (اتصال پایانی غیرهمولوگی) پیشنهاد می شود تا فعالیت ضد HBV از کریسپر/کَس 9 (CRISPR/Cas9)را بهبود دهد و جهش cccDNA را افزایش دهد. در این تحقیق، ما فعالیت ضد HBV از کریسپر/کَس 9 (CRISPR/Cas9)و نتایج ترمیم cccDNA را در یک محیط NHEJ/HR اصلاح یافته، مورد ارزیابی قرار دادیم. NU7026، یک مهارکننده قوی NHEJ است که مانع از تخریب میانی کریسپر/کَس 9 (CRISPR/Cas9)از cccDNA شده است و منجر به حذف های تکرار شونده هدفمند شده است. ما نتیجه می گیریم که کریسپر/کَس 9 (CRISPR/Cas9)یک ابزار بسیار موثر برای تخریب cccDNA است و ابتدا نشان می دهد که مهار NHEJ باعث کاهش تخریب cccDNA می شود.

ویروس هپاتیت B (HBV)، به طور مداوم، 250 میلیون نفر را در سراسر جهان آلوده می کند، و بیش از یک میلیون نفر از عواقب هپاتیت مزمن B (CHB) می میرند، که عمدتا سیروز و کارسینوم هپاتوسلولار (HCC) است (3-1) . HBV متعلق به خانواده هپادناویریده  است. ژنوم ویروسی ذره پوششی HBV شامل یک DNA دوگانه استاندارد جزئی سلولی است که از یک میانه RNA با استفاده از یک ترانس کریپتاز معکوس ، ترکیب می شود. پس از ورود، ویروس های HBV بدون پوشش هستند، و DNA حلقوی ساکن به نوکلئازی منتقل می شود که ان نوکلئاز از DNA حلقوی بسته کووالانسی (cccDNA) ترمیم می شود. cccDNA، مولفه کلیدی از چرخه عمر HBV است که بعنوان یک الگو برای رونویسی تمام RNAهای پیام رسان (mRNA) ویروسی شامل RNA پیش-ژنومی (pgRNA) بکار گرفته می شود (6-4).

 

توالی نسل-بعدی. نواحی هدف دار توسط کریسپر/کَس 9 (CRISPR/Cas9)و نواحی بدون هدف پتانسیل با استفاده از جفت پرایمرهای خاص و پلی مراز Q5 تقویت می شوند. امپلیکون ها با ژل تخلیص می شوند و با استفاده از کیت استخراج ژل کیاژن، استخراج می شوند، با یک فلورومتر کوبیت 2.0 (فناوری های عمر) اندازه گیری می شوند، و در نسبت های اکیومولار   یکی می شوند. سپس، آداپتورها برای توالی ایلومینا  پیوست می شوند. مجموعه اطلاعات (library) با 250 جفت بازخوانی نهایی با استفاده از ابزار MiSeq (ایلومینا) دنبال می شوند. نرم افزار FASTQC و نرم افزار جنیوس (Geneious ) برای ارزیابی کیفیت، همترازی منبع، دور انداختن بازخوانی های کیفیت پایین/ نوکلئوتیدها  ، و محاسبه جایگزین ها و ایندل ها، استفاده می شوند. کیفیت توالی از قبل- باز  و نمره های کیفیت پیش-توالی  در تمام گروه ها بیشتر از 30 بودند.

تصاویر فایل ورد ترجمه مقاله (جهت بزرگنمایی روی عکس کلیک نمایید)